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Insbesondere führt die Aktivierung von JNK-1, aber nicht von JNK-2 durch toxische FFA zu erhöhten zellulären Spiegeln der proapoptotischen BH3-Proteinmitglieder des Bcl-2-Proteins PUMA und die Stillegung dieses Todesmediators zur Abschwächung der Lipoapoptose [15]. Es ist auch bekannt, dass JNK Bim aktiviert [16], ein weiteres reines BH3-Protein, das zur Lipoapoptose beiträgt [12]. Somit kann ER-Stress direkt an eine Dysregulation von Bcl-2-Proteinen gekoppelt werden, die wiederum den mitochondrialen Weg der Apoptose auslösen. Zusammengenommen legen diese Beobachtungen nahe, dass puma berlin FFA Lipoapoptose sowohl durch Induktion von PUMA als auch von Bim induziert, was wiederum zur Aktivierung des nachgeschalteten Todesmediators Bax führt.
Die Gesamt-RNA wurde aus den Zellen unter Verwendung des Trizol-Reagens (Invitrogen) extrahiert und mit Moloney-Maus-Leukämievirus-Reverse-Transkriptase (Invitrogen) und Random-Primern puma blau (Invitrogen) in komplementäre DNA revers transkribiert. Die Quantifizierung der komplementären DNA-Matrize wurde mit Echtzeit-PCR (LightCycler; Roche Applied Science) unter Verwendung von SYBR-Grün (Molecular Probes) als Fluorophor durchgeführt.
In Übereinstimmung mit unserer vorherigen Beobachtung [15, 27] erhöhte PA die PUMA- und Bim-Zellproteinspiegel (Abbildung 5A). Im Gegensatz dazu waren die zellulären Spiegel anderer Nur-BH3-Proteine (Noxa, Bik, Bad, Bid), der proapoptotischen Multidomänen-Bcl-2-Proteine (Bak, Bax) und des antiapoptotischen Proteins Bcl-X L unverändert. In Übereinstimmung mit seinen zytoprotektiven Wirkungen puma blaze verringerte PO (PO 400 uM und PA 400 uM) die Bim- und PUMA-Induktion durch PA. Zusätzlich schwächte PO auch die PUMA-mRNA-Induktion durch PA ab (5B). Die Aktivierung von Bax, einem bekannten Mediator der mitochondrialen Dysfunktion, ist für die Induktion der Hepatozyten-Lipoapoptose nach der PUMA- und Bim-Induktion erforderlich [12, 15].
Zum Beispiel haben frühere Studien die Bedeutung der JNK-1-Aktivierung hervorgehoben, die zur PUMA-Proteininduktion während der Lipoapoptose führt [15]. In diesen Studien wird durch den genetischen Abbau von PUMA die Hepatozytenlipoapoptose abgeschwächt [15]. Die aktuelle Studie erweitert diese Beobachtungen, indem sie zeigt, dass die Hemmung des ER-Stresses mit PO diese JNK-abhängige Dysregulation proapoptotischer Bcl-2-Proteine abschwächt. Diese zytotoxischen Reaktionen auf gesättigte FFA scheinen auf ER-Stress zurückzuführen zu sein. Ein sich abzeichnendes Bild der Lipoapoptose entwickelt sich mit dem ER-Stress vor der JNK-Aktivierung, puma blue der dann wahrscheinlich zusammen mit anderen Mediatoren wie CHOP zu einer erhöhten PUMA-Transkription und Bim-Aktivierung beiträgt [35].
Diese Nur-BH3-Proteine lösen dann die Bax-Aktivierung aus und führen zum mitochondrialen Weg des Zelltods (Abbildung 6). Zusammenfassend legen unsere vorliegenden Ergebnisse nahe, dass das Lipokin PO den durch gesättigte FFA induzierten Zelltod in Hepatozyten durch Hemmung der ER-Stress-assoziierten Dysregulation von proapoptotischen Bcl-2-Proteinen abschwächt. Diese Daten verknüpfen die PO-Zytoprotektion mit einer vorteilhaften Wirkung auf die kernapoptotische Maschinerie der Zelle. Angesichts dieser mechanistischen Einsicht ist es verlockend zu spekulieren, dass sich PO und / oder potente PO-Analoga bei menschlicher NAFLD als vorteilhaft erweisen könnten.
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Die Zusammensetzung der Untereinheiten bestimmt den Phänotyp. Wenn neue Mitglieder der Säugetierunterfamilie von DEG / ENaC in peripheren Nerven bei Ratten und im menschlichen Gehirn identifiziert wurden (Price et al., 1996; Waldmann et al., 1996) und als säureempfindliches Ion bezeichnet wurden Die Unterfamilie der Kanäle (ASICs) (Waldmann et al., 1997a) hat uns fasziniert, dass diese Mitglieder möglicherweise auch eine Rolle bei der neurosensorischen Transduktion von Barorezeptoren spielen asics ds trainer 22 (Bianchi und Driscoll, 2002; Krishtal, 2003; Wemmie et al., 2006) ).
In den Karotiskörpern sind Typ-1-Glomuszellen die chemosensitiven Zellen, die durch Hypoxämie, Hyperkapnie und Azidose aktiviert werden. Die Depolarisation von Glomuszellen führt zur synaptischen Aktivierung benachbarter Carotis-Nervenenden, die sowohl Hyperventilation als auch sympathische Aktivierung asics ds trainer damen hervorrufen. Wir stellten die Hypothese auf, dass ASICs als pH-Sensoren in Glomuszellen dienen könnten. Die RT-PCR zeigte eine relativ hohe Expression von ASIC3- und ASIC1b-mRNA in Ratten-Carotis-Körpern im Vergleich zu einer geringeren Expression von ASIC1a, -2a und 2b. Immunfluoreszenz zeigte, dass ASIC1 (Antikörper erkennt sowohl "1a als auch "1b) und ASIC3 in Clustern innerhalb von Glomuszellen mit vernachlässigbarer Expression von ASIC2 vorliegen (Tan et al., 2007) (Abb. 11).
Die pathologische Relevanz dieser wechselseitigen Reflexstörung ist in mehreren Tiermodellen und bei Menschen mit Herzinsuffizienz, Bluthochdruck, Myokardinfarkt asics dynaflyte damen und obstruktiver Schlafapnoe offensichtlich, was zu übermäßiger sympathischer Aktivität und verminderter parasympathischer Aktivität führt, die zu erhöhter Mortalität und Morbidität beitragen (Zucker et al ., 2007; Schultz et al., 2007; Somers et al., 1988; Abboud, 2010; Abboud und Kumar, 2014). Unsere neuere Arbeit, die ASICs als molekulare Determinanten dieser abnormalen Reflexe auf der Ebene sensorischer Endpunkte in Baro- und Chemorezeptoren definiert, ist faszinierend (Lu et al., 2009; Sabharwal et al., 2005; Tan et al., 2007).
Die Co-Lokalisierung von ASIC3 und TASK1 und die Co-Lokalisierung von jeweils mit TH (Tyrosinhydroxylase) spiegeln ihre Verteilung in Glomuszellen vom Typ 1 wider. Zusätzlich zu Änderungen in der Anzahl der exprimierten ASIC-Kanäle können zwei weitere Mechanismen, an denen ASICs beteiligt sind, dazu beitragen die verminderte Erregbarkeit von Barorezeptoren oder die erhöhte pH-Empfindlichkeit von Chemorezeptoren bei SHR. Eines ist die ASIC-Hemmung der BK-Kaliumkanäle und das andere ist die heteromere Zusammensetzung der ASIC-Kanäle. Zum Beispiel haben wir festgestellt, dass die Nodose-Neuronen der SHR ein relativ asics dynamic duomax größeres negatives Ruhemembranpotential ( 57,0 ± 2,9 mV) hatten und viel kleiner waren empfindlicher gegen depolarisierende Strominjektion als WKY-Ratten (-45,9 ± 4,1 mV) (La Rovere et al., 1998).
Eine unerwartete inhibitorische Wechselwirkung zwischen ASICs und Maxi-K (BK, die Ca 2 -sensitiven K-Kanäle) kann für diese Anomalien verantwortlich sein. Wir fanden heraus, dass ASICs BK-Ströme hemmen, wenn ASIC und BK in enger Assoziation in der Zellmembran gemeinsam exprimiert werden (Petroff et al., 2008, 2012). Die verringerte Expression von ASIC2 in SHR-Nodose-Neuronen kann die BK-Aktivität hemmen oder verstärken, was zu einem negativeren Ruhemembranpotential und einer stärkeren Unterdrückung der mechanisch induzierten Depolarisation führen kann.