L'EGFR et son variant EGFRvIII activé puma suede de manière constitutive sont liés à la résistance au glioblastome en thérapie, mais les mécanismes sous-jacents de cette association restent encore flous. Nous rapportons que, dans le glioblastome, EGFR / EGFRvIII co-exprime paradoxalement avec le modulateur de l'apoptose régulé positivement par p53 (PUMA), un membre pro-apoptotique de la famille de protéines Bcl-2 principalement situées sur la mitochondrie.

La plupart des agents anticancéreux induisent une apoptose intrinsèque à médiation par les mitochondries plutôt qu'une apoptose à médiation par un récepteur de mort extrinsèque [19; 20]. Les membres anti-apoptotiques de la famille de protéines Bcl-2, y compris Bcl-2, Bcl-xL et puma heart Mcl-1, sont les gardiens de l intégrité mitochondriale [19; 21; 22]. Inversement, les membres proapoptotiques de la famille de protéines Bcl-2 fonctionnent en antagonisant les protéines anti-apoptotiques et incluent .

Nous avons étudié l'interaction entre PUMA basket puma et l'EGFR et son rôle potentiel dans les monothérapies mono et combinatoires ciblées sur l'EGFR. Nos résultats montrent que paradoxalement, l'EGFR et l'EGFRvIII de type sauvage coexpriment avec la protéine pro-apoptotique PUMA dans des cellules GBM, in vitro et in vivo. EGFR et EGFRvIII interagissent avec PUMA de manière constitutive et sous stress apoptotique, conduisant à la séquestration cytoplasmique de PUMA dans les cellules GBM.

En revanche, PUMA est puma femme exclusivement localisé sur les membranes mitochondriales, comme prévu, dans les cellules GBM négatives pour EGFR. Ces résultats, ainsi que des données supplémentaires provenant d études fonctionnelles, fournissent la preuve d un nouveau lien fonctionnel inverse entre la signalisation EGFR / EGFRvIII et la voie proapoptotique, ce qui peut constituer un mécanisme explicatif de la résistance aux médicaments associée à l EGFR dans les GBM et, éventuellement, dans d autres.

Tous les produits chimiques ont été achetés auprès de Sigma (St. Louis, MO) sauf indication contraire. L'anticorps anti-EGFR polyclonal de lapin utilisé dans le transfert Western a été acheté chez Santa Cruz Biotech. (sc-03; Santa Cruz, Californie). Les vecteurs d'expression chaussure puma EGFR et EGFRvIII ont déjà été générés dans notre laboratoire [9] et les deux protéines ont été exprimées sous forme de protéines de fusion marquées par Myc.

Les coupes de tissus ont été déparaffinées, déshydratées et soumises à une récupération d'antigène dans un tampon contenant de l'EDTA dans un four. L'activité de la peroxydase endogène a été bloquée avec du peroxyde d'hydrogène à 0,3% et les lames ont été incubées avec du sérum de chèvre normal à 10% pendant 30 min, puis avec un anticorps monoclonal de souris anti-EGFR (1:50; Novocastra RTU-EGFR-384) et polyclonal de lapin anti-PUMA. anticorps (1: 100;